Vairāki enzīmi, ko parasti izmanto PCR eksperimentos

Polimerāzes ķēdes reakcija, saīsināti kāPCRangļu valodā ir molekulārās bioloģijas paņēmiens, ko izmanto specifisku DNS fragmentu pastiprināšanai.To var uzskatīt par īpašu DNS replikāciju ārpus ķermeņa, kas var ievērojami palielināt ļoti nelielu DNS daudzumu.Visā laikāPCRreakcijas procesā svarīga loma ir vienai vielu klasei – fermentiem.

1. Taq DNS

Eksperimentos pirmajās dienāsPCR, zinātnieki izmantoja Escherichia coli DNS polimerāzi I, Bet ar šo enzīmu ir problēma: katru reizi, kad tiek veikts cikls, tam ir jāpapildina jauns enzīms, kas padara operācijas posmus nedaudz sarežģītus un to ir grūti pilnībā automātiski pastiprināt.Šī problēma tika atrisināta pēc tam, kad zinātnieki 1988. gadā nejauši izolēja Taq DNS polimerāzi no Thermus aquaticus. Kopš tā laika automātiskā DNS pastiprināšana ir kļuvusi par realitāti.Šī fermenta atklāšana arī padaraPCRtehnoloģija ir ērta, praktiska un universāla tehnoloģija.Pašlaik Taq DNS polimerāze ir visizplatītākā polimerāze DNS komplektos.

2. PfuDNA

Kā minēts iepriekš, Taq DNase ir liela kļūda, tāpēc zinātnieki ir zināmā mērā modificējuši Taq DNS polimerāzi, lai izvairītos no nespecifiskas amplifikācijas nesakritības dēļ, kā rezultātā testa rezultāti ir neprecīzi.Bet Taq DNS polimerāzes modifikācija var kavēt DNS polimerāzes aktivitāti istabas temperatūrā.PfuDNA polimerāze var labi kompensēt iepriekš minētos Taq DNS polimerāzes trūkumus, lai PCR reakciju varētu veikt normāli un varētu efektīvi uzlabot mērķa gēna amplifikācijas panākumu līmeni.

3. Reversā transkriptāze

Reversā transkriptāze tika atklāta 1970. gadā. Šis enzīms izmanto RNS kā veidni, dNTP kā substrātu, ievēro bāzu savienošanas principu un sintezē DNS vienu virkni, kas ir komplementāra RNS veidnei 5′-3′ virzienā.Reversā transkriptāze galvenokārt ir atkarīga no DNS polimerāzes aktivitātes no DNS vai RNS veidnēm, un tāpēc tai nav 3′-5′ eksonukleāzes aktivitātes.Tomēr tam ir RNāzes H aktivitāte, kas zināmā mērā ierobežo reversās transkriptāzes sintēzes ilgumu.Savvaļas reversās transkriptāzes zemās precizitātes un termostabilitātes dēļ zinātnieki to arī modificēja.

PriekšPCREksperimentos galvenie palīgmateriāli ir: individuāla PCR caurule, 4/8 sloksnes PCR caurule, PCR plāksnes.

Labio'sPCR palīgmateriāliir šādaspriekšrocības:

PCR plāksnes: Plaša termociklera savietojamība;Augsts kontrasts, viegla aku identificēšana;labi fluorescences atstarojums;labisiltuma pārnese;Sertificēti DNāzes, RNāzes, DNS, PCR inhibitori un pārbaudīti, ka tie nesatur pirogēnus.

Atsevišķas PCR caurules: Iztvaikošanas izturīgs; labssiltuma pārnese;izcila optiskā skaidrība; sertificēti DNāzes, RNāzes, DNS, PCR inhibitori un pārbaudīti bez pirogēna.

4/8 sloksņu PCR mēģenes: Īpaši plānas sienas; augsta skaidrība; laba fluorescences atstarošana;var izmantot farmācijas rūpniecībā, pārtikas rūpniecībā un molekulārajā bioloģijā; augstas kvalitātes neapstrādāts PP materiāls; sertificēti DNāzes, RNāzes, DNS, PCR inhibitori un pārbaudīti bez pirogēniem.